Hatékony és alacsony költségű eljárás az élesztőt expresszáló rekombináns fehérjék tisztázására és ultraszűrésére

Az exogén gének élesztő expressziója nemcsak rekombináns fehérjéket és peptideket, antitesteket és vakcinákat, citokineket, növekedési faktorokat, hormonokat és egyéb bioaktív anyagokat tud termelni, hanem ipari enzimek, funkcionális élelmiszerek és biológiai anyagok előállítására is felhasználható, aminek széleskörű alkalmazási lehetőségei vannak. .

 

Az élesztő expressziós rendszer két általánosan használt expressziós rendszert tartalmaz, azaz a saccharomyces cerevisiae expressziós rendszert és a metanotróf élesztő expressziós rendszert. A metanol élesztő expressziós rendszer jelenleg a legszélesebb körben használt élesztő expressziós rendszer, és a Pichia a leggyakrabban használt, amely képes a metanolt szénként és energiaként használni. Ezen kívül van Hansen élesztője, Sphaeroides és így tovább.

 

Függetlenül attól, hogy milyen élesztő expressziós rendszerről van szó, a lefelé irányuló elválasztási és tisztítási folyamatai hasonlóak, és a specifikus folyamatfolyamat a rekombináns fehérjék és polipeptid gyógyszerek élesztő expresszióját veszi példának.

 

A vezető mikroszűrő membránkazetták nyitott áramlási csatornát és tangenciális áramlású szűrési módot alkalmaznak, amely hatékonyan képes nagy sebességgel feldolgozni az összetett tápfolyadékokat, például az élesztő fermentációs folyadékot és az E. coli krakkolófolyadékot, és biztosítja a lineáris amplifikációt a kis teszttől a gyártási méretig. A kompakt moduláris felépítés, az egyszerű csővezeték-csatlakozás, a rendszer függetlensége és olvashatósága védi a kezelőket és megakadályozza a biológiai szennyezést. És nincs karbantartás és tisztítás ellenőrzése. Ezért nagyon alkalmas a korai downstream feldolgozás tisztázási lépésére.

 

Az UF/DF folyamat fő célja a szennyeződések eltávolítása és a pufferek kiszorítása. Az irányító ultraszűrő membránkazetta jó homogenitású a membrán pórusmérete és erős hidrofilitása, amely nagyobb fluxust és alacsonyabb fehérje adszorpciót biztosít a membránnak, valamint optimalizált áramlási csatorna kialakítást, kisebb nyomásesést, könnyű anyagátvitelt és jelentősen lerövidíti a szűrési időt. Ezenkívül a terméksorozat teljes és rugalmas, hogy megfeleljen a különböző méretű alkalmazások igényeinek. Ezért nagyon alkalmas a downstream feldolgozás UF/DF lépésére.

 

A következő a Guidling membrán alkalmazási esetekazettarekombináns fehérjék élesztő expressziójában.

 

Mikroszűréses derítés

{{0}},11 négyzetméteres 0,22 μm pórusú membránkazettát használtunk 1,5 literes élesztő fermentációs folyadék (célfehérje molekulatömeg 42-55 KD) mikroszűréssel történő derítéséhez. A mikroszűrés teljes folyamatában a célfehérje visszanyerési sebességét, a zavarosság változását és a membrán fluxus kimerülését vizsgáltuk.

A 0-17min a koncentrálási folyamat, a 17-32min a mosási és szűrési folyamat. A teljes mikroszűrési folyamat során a TMP fokozatosan nőtt, a folyadék bemeneti sebessége változatlan maradt, és az átlagos anyagáram 45LMH volt.

A folyadék zavarossága mikroszűrés előtt 600 NTU, mikroszűrés után 8 NTU volt, és a zavarosság nyilvánvalóan megváltozott.

Az eredmények azt mutatták, hogy a célfehérje hozama > 90%. A Guidling Technology 0,22 μm-es membránkazetta stabil és alkalmas erre az alkalmazási forgatókönyvre.

 

Ultrafiltrációs koncentráció

 

 

Az eredmények azt mutatták, hogy a célfehérje teljesen beszorult. A Guidling Technology 10 kd membránkazetták stabilan működnek, és alkalmasak erre az alkalmazási forgatókönyvre.

Az élesztő által expresszált rekombináns fehérjék többsége nem expresszálódott erősen. A szűrt folyadék zavarossága nyilvánvalóan csökkent, és a fehérje visszanyerési sebessége nagyobb volt. Mivel az ezt követő kromatográfiás idő túl hosszú, káros hatással lesz a fehérjére, a kromatográfiás mintavételi idő lerövidítése érdekében egy ultraszűrési töményítési lépést lehet hozzáadni, és a minta után gyorsan koncentrálható a célfehérje, ami elérni az időmegtakarítás célját, csökkenteni a töltőanyag mennyiségét és ezáltal csökkenteni a gyártási költségeket.

 

A Guidling Technology mikroszűrő membránkazetták általában 20 NTU alá csökkentik a betáplált folyadék zavarosságát, teljes mértékben kielégítve a későbbi ultraszűrés és kromatográfia igényeit. Az ultraszűrő membránkazetták ultraszűrési visszanyerési sebessége a különböző anyagoktól függően eltérő lehet, az általános visszanyerési arány elérheti a 90-95%-ot.

A Guidling Technology örömmel várja, hogy tesztkészleteket kérjen a kapcsolódó értékeléshez.

 

Guidlingről

A Guidling Technology egy nemzeti csúcstechnológiai vállalkozás, amely a biogyógyszerekre, a sejttenyésztésre, a biomedicina tisztítására és koncentrálására, a diagnózisra és az ipari folyadékokra összpontosít. Sikeresen fejlesztettünk centrifugális szűrőeszközöket, ultraszűrő és mikroszűrő kazettákat, vírusszűrőket, TFF rendszereket, mélységi szűrőket, üreges szálakat stb. Amelyek teljes mértékben megfelelnek a biogyógyszerek, a sejttenyésztés és így tovább. Membránjainkat és membránszűrőinket széles körben használják az előszűrés, a mikroszűrés, az ultraszűrés és a nanoszűrés koncentrálására, extrakciójára és szétválasztására. Számos termékcsaládunk, a kisméretű, egyszer használatos laboratóriumi szűréstől a gyártási szűrőrendszerekig, a sterilitásvizsgálaton, a fermentáción, a sejttenyésztésig és még sok másig megfelel a tesztelés és a gyártás igényeinek. A Guidling Technology alig várja, hogy együttműködjön Önnel!