A sertés-hasmenés elleni oltás downstream tisztítási folyamata

A hasmenés egyike annak a három fő betegségnek, amelyek jelentős gazdasági veszteségeket okoztak a sertésiparnak Kínában. A sertések hasmenését számos tényező okozza, és a vírusos tényezők a legsúlyosabbak. Minden korú sertés fertőződhet, különösen a szopós malacok, és a fertőzés utáni mortalitás elérheti az 50%-ot. A sertés járványos hasmenés vírusa (PEDV) és a sertés fertőző gastroenteritisz vírusa (TGEV) elterjedt a világon, és a két vírus egyenként vagy kombinációban is fertőződhet. Jelenleg nincsenek specifikus gyógyszerek a PEDV és a TGEV kezelésére, és a sertéshasmenés megelőzésére és ellenőrzésére főként kereskedelmi forgalomban kapható vakcinák szolgálnak.

A sertésjárványos hasmenés elleni hagyományos vakcinák főként teljes vírussal inaktivált vakcinát és élő attenuált vakcinát tartalmaznak. Klinikailag általában PEDV és TGEV tandem inaktivált vakcinát vagy legyengített vakcinát, valamint PEDV, TGEV és sertés rotavírus (RV) hármas inaktivált vakcinát vagy attenuált vakcinát használnak, többnyire PEDV és TGEV tandem vakcinát.

Jelenleg Kínában számos vakcina létezik a sertésjárványos hasmenés ellen.

Az inaktivált és attenuált vakcinák előállítási folyamata hasonló, főként a kórokozótenyésztés öt lépéséből, a kórokozó inaktiválásából vagy gyengítéséből, a kórokozók kivonásából és tisztításából, a vakcina előkészítéséből és csomagolásából, valamint a vakcina minőség-ellenőrzéséből áll. Ez a cikk elsősorban a kórokozók tisztításának eljárását mutatja be.

Pontosítás

A tisztázás célja a sejttörmelék és egyéb nagyméretű részecske-aggregátumok eltávolítása. A különféle méregek sejtkultúra-termelésében amellett, hogy nagyszámú vírusrészecskét tartalmaz, sok sejtszövet-törmelék és anyagcseretermék és egyéb szennyeződés is előfordul, így a méreg zavaros vagy félhomályos állapotú, a közvetlen Ennek a méregkoncentrációnak a használata hamarosan az ultraszűrő membránt blokkolja, és nem tudja befejezni a méreg koncentrációját, ami az ultraszűrő membrán törmelékét eredményezi. Ezért a méreg koncentrálása előtt először tisztázni kell, amit általában kis sebességű centrifugálással és membránszűréssel végeznek. Meg kell jegyezni, hogy a membránszeparációs technológia alkalmazásakor, mivel a membrán anyaga gyakran elektronegativitással vagy hidrofób csoportokkal rendelkezik, meg kell vizsgálni, hogy a membrán anyaga adszorpciót mutat-e a vírusrészecskékhez.

A hatékony derítési lépéshez a nagy szilárdrészecske-eltávolítási kapacitás és a nagy termékhozam, az egyszerű amplifikáció és a későbbi, későbbi működési egységek védelmének kombinációja szükséges. Jelenleg mélyszűrőt használnak a derítési művelethez.

Ha azonban a művelési méret túl nagy, nagyszámú mélyszűrőmembránra lesz szükség, ami jelentősen megnöveli a fogyóeszközök költségét. Ugyanakkor a sejttenyészet nagy sűrűsége csökkenti a mélyszűrő membrán terhelését, ami megnövekedett költségeket és a termék túlzott hígulását eredményezi.

A mikroszűrési módszer főként tangenciális áramlású szűrőberendezést használ, és a membránelemek lapos membránkazetta és üreges szál. A tangenciális áramlási szűrést (TFF) a transzmembrán nyomáskülönbség hajtja. A membrán pórusméreténél kisebb anyagok és szennyeződések áthaladnak a membránon, míg a szennyeződések, például a nagyobb részecskéket tartalmazó sejtek beszorulnak. A mikroszűréshez használt membrán pórusmérete {{0}},45/0,22μm. Az üreges szál tangenciális áramlású mikroszűrése közvetlenül feldolgozhatja a nagy szilárdanyag-tartalmú folyadékot, például a nagy sűrűségű sejttenyésztő tápközeget, kevesebb lépéssel és egyszerű működéssel kiküszöbölheti a centrifugálási és előszűrési lépéseket, a membrán ismételten használható a tisztítás során, csökkentve a berendezések befektetését és működését költségek, összhangban a moduláris automatizált gyártás követelményeivel.

Töményítés és tisztítás

Az előzetes tisztázás után a vírustenyésztő táptalaj még mindig nagyszámú szennyeződést tartalmaz, beleértve a hibás részecskéket, vírushéjat, citotoxint, táptalajt, szérum- és sejtfragmenseket stb. Ha ezeket a szennyeződéseket állatokba fecskendezik, nem csak a vírus hatékonyságát befolyásolják. a vakcinát, hanem erős immunválaszt is kiválthatnak a gazdaszervezetben, sőt a beoltott állatok elhullásához is vezethetnek. Ezért koncentrálásra és tisztításra van szükség a szennyeződések, például a heteroproteinek és sejtfragmensek eltávolításához, a hatékony immunválasz fokozásához és indukálásához, a felhasznált vakcina mennyiségének csökkentéséhez és a mellékhatások csökkentéséhez.

A vírustisztítás alapelve: a vírus biológiai aktivitásának és fertőzőképességének fenntartása alapfeltételként, a vírusszennyeződések eltávolítása és a vírus nagy tisztaságának kinyerése.

Jelenleg a nagyüzemi termelésben alkalmazott fő koncentrálási és tisztítási módszerek az ultraszűrés.

Az ultraszűrési módszer elsősorban érintőleges áramlású ultraszűrő berendezést, üreges szálas szűrőrendszert és egyéb szűrőberendezéseket használ, normál körülmények között az ultraszűrési módszer alkalmazása több mint 100-szoros víruskoncentrációt eredményezhet, a heteroprotein eltávolítási aránya pedig akár 99%. Ezek közül az üreges szálas membránszűrési technológia előnye az enyhe és alacsony nyíróerő, a könnyű csatlakoztatás, a rugalmas működés, a hosszú élettartam és az alacsony költség, valamint az egyszerű amplifikáció, ezért ajánlatos üreges szálat választani a víruskoncentrációhoz és tisztításhoz.

Ultraszűrési módszer alkalmazása esetén a koncentrálásra és tisztításra nagyon fontos a megfelelő membrán pórusméret kiválasztása, amely közvetlenül meghatározza a koncentrálás hatékonyságát és minőségét. Egyrészt szükséges a membrán apertúra kiválasztása a célmolekulák hatékony befogásához a hozam biztosítása érdekében, másrészt a heteroproteinek eltávolítási hatását és feldolgozási sebességét is teljes mértékben figyelembe kell venni. Ezért a legjobb elv az, hogy kiválasztjuk a legnagyobb pórusméretű membránt, amely be tudja zárni a célmolekulát, és megpróbáljuk kiválasztani az egyenletes pórusméret-eloszlású szűrőmembránt.

A sertésjárványos hasmenésvírus (PEDV) és a transzmissziós gastroenteritisz vírus (TGEV) egyaránt koronavírusok, amelyek polimorf gömbök, fejjel lefelé, tüskékhez hasonló tüskékkel, amelyek átmérője 60 és 190 nm között van. A rotavírus-betegség egy zoonózisos betegség, amelyben a rotavírus (RV) kerékszerű megjelenésű és körülbelül 70 nm átmérőjű. Ez a három vírus általában elfogható 100-750kd nyílású ultraszűrő membránokkal.

A Guidling Technology egy nemzeti csúcstechnológiai vállalkozás, amely a biogyógyszerekre, a sejttenyésztésre, a biomedicina tisztítására és koncentrálására, a diagnózisra és az ipari folyadékokra összpontosít. Sikeresen fejlesztettünk centrifugális szűrőeszközöket, ultraszűrő és mikroszűrő kazettákat, vírusszűrőket, TFF rendszereket, mélységi szűrőket, üreges szálakat stb. Amelyek teljes mértékben megfelelnek a biogyógyszerek, a sejttenyésztés és így tovább. Membránjainkat és membránszűrőinket széles körben használják az előszűrés, mikroszűrés, ultraszűrés és nanoszűrés koncentrálására, extrakciójára és szétválasztására. Számos termékcsaládunk, a kisméretű, egyszer használatos laboratóriumi szűréstől a gyártási szűrőrendszerekig, a sterilitásvizsgálaton, a fermentáción, a sejttenyésztésig és még sok másig megfelel a tesztelés és a gyártás igényeinek. A Guidling Technology alig várja, hogy együttműködjön Önnel!