Az ultraszűrés alkalmazása a DTP vakcina előállítási folyamatában

FelhasználásaUltrafiltráció aPtermelésProcess ofDTP Vaccine

 

1. DTP vakcina

A pertussis, közismert nevén szamárköhögés, a Bordetella pertussis által okozott akut légúti fertőző betegség, amely elsősorban csecsemőket és kisgyermekeket érint. Légúti cseppeken keresztül terjed, lappangási ideje 7-10 nap. A betegnél a köpet felhalmozódásának tünetei jelentkeznek, beleértve a köhögést is. A diftéria a Corynebacterium diphtheriae által okozott akut légúti fertőzés. A baktériumok behatolnak az orrnyálkahártyába vagy a torokba, elszaporodnak, exotoxinokat termelnek és helyi gyulladást és szövetelhalást okoznak. A Clostridium tetani által okozott tetanusz bőr- vagy nyálkahártya sebeken keresztül jut be az emberi szervezetbe. Anaerob körülmények között virágzik és méreganyagokat termel, ami görcsös izomösszehúzódásokat vált ki.

A DTP vakcina egy kombinált vakcina, amely a Bordetella pertussis, a diftéria toxin és a tetanusz toxin hatékony összetevőit tartalmazza bizonyos arányban keverve, és alumínium-hidroxid adjuvánsra adszorbeálva. Három betegség megelőzésére szolgál: pertussis, diftéria és tetanusz.

 

2. A DTP vakcina előállítási folyamata

A DTP vakcina jellemzően inaktivált vakcina. A DTP vakcina elkészítése az inaktivált vakcina gyártási folyamatát követi, elsősorban biztonsági okokból. Jelenleg a DTP-vakcinák gyártási folyamata Kínában nagyrészt az 1970-es és 1980-as évek technológiáján alapul. A folyamat során azonban a dialízis lépései túl sok hagyományos szűrési szakaszt tartalmaztak, ami jelentősen befolyásolta a termék általános gyártási folyamatát. A nyitott csatornákkal rendelkező tangenciális áramlású membránszűrő termékek előnyöket kínálnak a biológiai termékek leválasztásában, például alacsony nyíróerővel és magas visszanyerési sebességgel. Különösen alkalmasak nagy koncentrációjú, nagy viszkozitású és nagy részecsketartalmú minták elválasztására, így alkalmasak DTP vakcinák gyártási folyamatára.

3. Üreges szálas ultraszűrő technológia alkalmazása a sejtmentes DTP kombinált vakcina antigén folyadék tisztítási folyamatában

(1) Anyagok és módszerek

① Minta

Dekontaminált és finomított sejtmentes DTP antigén oldat (a továbbiakban: dekontaminált antigén oldat).

②Fő reagensek és műszerek

Injekciós minőségű víz; nátrium-klorid (gyógyszerészeti minőségű); dialízis táska; 10 kDa üreges szál; perisztaltikus szivattyú.

③ A sejtmentes DTP antigén folyadék ultraszűrése és tisztítása

Először is koncentrálja a dekontaminált antigénoldatot a kezdeti térfogat 5-szeresére egy 10 kDa-os üreges szál segítségével. Ezt követően kezdje meg a szűrési és mosási folyamatot. Ezután állítsa le a szűrést, amikor a szűrlet térfogata eléri a kezdeti térfogat körülbelül 4-5-szörösét. Végül öblítse le az egész rendszert, és vegye vissza a szűrletet 1-szeres térfogatú fiziológiás sóoldattal.

④ Sejtmentes DTP antigén folyadék dialízise és tisztítása

A dekontaminált antigénoldatot aszeptikus körülmények között csomagolja dialízistasakokba, és merítse 0,85%-os steril nátrium-klorid oldatba, majd végezze el a dialízist 2-8 fokon.

⑤A tisztított folyadék azonosítása

Az ultraszűréssel és a dialízissel visszanyert folyadékmintákat arányosan állítsa vissza a tisztítás előtti térfogatra. Használjon dekontaminált antigénoldatot kontrollként, és elemezze a minták tisztaságát 12%-os SDS-PAGE-val. Mérje meg az oldatok szilárdanyag-tartalmát, és számítsa ki a visszanyerési sebességet, miután a mintákat 10, 000 fordulat/perc mellett 15 percig centrifugálta.

Eredmények

① Üreges szálas ultraszűrő töményítés és mosás

Az ultraszűrési koncentrálási folyamat során 70 percen belül 4800 ml szűrlet keletkezik, ami 5--szeres koncentrációt eredményez. A szűrési sebesség folyamatosan csökken, átlagos szűrési sebessége 42 LMH (69,6 ml/perc). A mosási folyamat során 90 percen belül 5300 ml szűrletet kapunk, ami 4{11}}szeres mosást eredményez, és a szűrési sebesség folyamatosan csökken, átlagos szűrési sebessége 36 LMH (59,5 ml/perc). Végül öblítse át a teljes rendszert 1200 ml fiziológiás sóoldattal, és keverje össze az öblítőoldatot az előző mosóoldattal (1200 ml). A folyadék végső koncentrációs tényezője 2.{20}}szerese. Az ultraszűréshez képest a dialízishez a dializátum ötszöri cseréje szükséges, és körülbelül 6 napig tart.

② A tisztított folyadék azonosítása

Az SDS-PAGE analízis kimutatta, hogy az ultraszűréssel és dialízissel tisztított sejtmentes DTP vakcina antigén folyadék tisztasága viszonylag változatlan marad, amint az az alábbi ábrán látható. Az ultraszűréses tisztítás visszanyerési sebessége valamivel alacsonyabb, mint a dialízises tisztításé, amint azt az alábbi táblázat mutatja.

Minta	Szilárd tartalom (%)	Felépülési arány(%)
Dekontaminált antigén oldat	0.872	/
Ultraszűréssel visszanyert folyadék (csökkentett)	0.803	92.1
Dialízissel visszanyert folyadék (csökkentett)	0.813	93.2

 

Következtetés

Az üreges szálas ultraszűrés egy membránszétválasztó technológia, amelyet széles körben használnak olyan iparágakban, mint az élelmiszeripar, a fermentáció, a gyógyszeripar, a környezetvédelem és a vegyipar nagy molekulájú anyagok elválasztására, koncentrálására és tisztítására. Ebben a kísérletben üreges szálas ultraszűrő technológiát alkalmaztunk a dekontaminált sejtmentes DTP antigén oldat tisztítására. A kísérletvezető összehasonlította a hagyományos dialízissel a tisztítási hatékonyság és a visszanyerési sebesség tekintetében. Az eredmények azt mutatták, hogy az ultraszűrés hatékonyabban távolította el a méregtelenítő ágenseket és pigmenteket (3 órán belül elérhető, összehasonlítva a dialízis 5-7 napjával), és magasabb volt a visszanyerési arány. Ezek azt sugallják, hogy az üreges rostok alkalmazása a sejtmentes DTP vakcina antigén folyadék ultraszűréses tisztítására megvalósítható. Kiválthatja a meglévő dialízis folyamatokat.